緩沖溶液作用原理和pH值:當往某些溶液中加入一定量的酸和堿時,有阻礙溶液pH變化的作用,稱為緩沖作用,這樣的溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽的混合溶液(如HAc與NaAc),弱堿及其鹽的混合溶液(如NH3·H2O與NH4Cl)等都是緩沖溶液。由弱酸HA及其鹽NaA所組成的緩沖溶液對酸的緩沖作用,是由于溶液中存在足夠量的堿A-的緣故。當向這種溶液中加入一定量的強酸時,H 離子基本上被A-離子消耗:所以溶液的pH值幾乎不變;當加入一定量強堿時,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-離子而阻礙pH的變化。pH緩沖溶液有何用途:檢查儀器顯示值和標準溶液的pH值是否一致。Tris-EDTA緩沖液(1×TE,pH8.0)
從試劑瓶取用試劑,用左手持量筒(或試管),并用大姆指指示所需體積刻度處。右手持試劑瓶(注意:試劑標簽應向手心避免試劑沾污標簽),慢慢將液體注入量筒到所指刻度。讀取刻度時,視線應與液體凹面的低處保持水平。倒完后,應將試劑瓶口在容器壁上靠一下,再將瓶子豎直,以免試劑流至瓶的外壁。如果是平頂塞子,取出后應倒置桌上,如瓶塞頂不是扁平的,可用食指和中指(或中指和無名指)醫學教育|網搜集整理將瓶塞夾住(或放在潔凈的表面皿上),切不可將它橫置桌上。取用試劑后應立即蓋上原來的瓶塞,把試劑瓶放回原處,并使試劑標簽朝外,應根據所需用量取用試劑,不必多取,如不慎取出了過多的試劑,只能棄去,不得倒回或放回原瓶。以免沾污試劑。甲基橙-苯胺藍指示劑固體試劑的取用:貼標簽的一面必須朝向手心處【防止藥液灑出腐蝕標簽】。
G418又稱遺傳霉素,新霉素,對細菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳動物細胞具有氨基苷類毒性,對真核細胞進行篩選。G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一種氨基糖苷類 ,這種氨基糖類的結構和新霉素、慶大霉素、卡那霉素相似,在分子遺傳試驗中,是穩定轉染常用的抗性篩選試劑。它通過克制轉座子Tn601,Tn5的基因,干擾核糖體功能而阻斷蛋白質合成,對原核和真核等細胞產生東西,包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞 ,也包括原生動物和蠕蟲。當neo基因被整合進真核細胞DNA后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉錄為mRNA ,從而獲得抗性產物氨基糖苷磷酸轉移酶的表達 ,使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉移、基因敲除、抗性篩選以及轉基因動物等方面得以普遍應用。
BCA蛋白檢測試劑盒是進行蛋白質濃度測定的常見的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是:蛋白質在堿性條件下,可以將二價Cu2+離子還原成一價Cu+離子。產生的一價Cu+離子可以與BCA(Bicinchoninicacid)試劑結合,終生成紫色的復合物。該復合物在562nm處有很強的吸收峰。復合物的多少與蛋白質的濃度呈接近的線性關系。BCA蛋白檢測試劑盒有許多優點:檢測的靈敏度高,檢測的蛋白質濃度下限可達20μg/mL。線性范圍廣,在20-2000μg/mL的范圍內,呈接近的線性關系。兼容性良好,產品可以兼容的化學物質非常普遍。BCA蛋白檢測試劑盒有許多優點:檢測的靈敏度高。
科研實驗中試劑取用應注意事項:1. 固體試劑的取用:取用固體藥品時藥匙必須是干凈的.一支藥匙不能同時取用兩種或兩種以上的試劑.藥匙每取完一種試劑后都必須用干凈的紙擦拭干凈,以備下次使用.藥匙的兩端為大小兩匙,取固體量較多時用大匙,較少時用小匙。2. 取用不定量(較多)液體——直接傾倒a. 瓶塞必須倒放在桌面上【防止藥品腐蝕實驗臺或污染藥品】;b. 直接傾倒時瓶口必須緊挨試管口,試管45度,并且緩緩地倒【防止藥液損失】;c. 貼標簽的一面必須朝向手心處【防止藥液灑出腐蝕標簽】;d. 倒完液體后,要立即蓋緊瓶塞,并把瓶子放回原處,標簽朝向外面【防止藥品潮解、變質】。檢測試劑盒可在試管中按規則的稀釋度稀釋后再加樣。改良Gomori三色染色液
每種細胞對G418的敏感性不同,一般變動在100ug/ml~1000ug/ml范圍。Tris-EDTA緩沖液(1×TE,pH8.0)
淋巴細胞分離液:淋巴細胞分離液是一種根據細胞密度差異,借助離心產生的重力加速度,進行細胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細胞分離液有Ficoll淋巴細胞分離液、Percoll淋巴細胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個核細胞的方法均為密度梯度離心法。分離原理:外周血中單個核細胞和單核細胞,其體積、形態和密度與其他細胞不同,淋巴細胞分離液是一種密度介于1.075~1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。淋巴細胞分離液Lymphocyte Separation Medium(human, Ficoll-Paque )是世界范圍內用于體外研究分離人淋巴細胞的實驗室公認的標準。Tris-EDTA緩沖液(1×TE,pH8.0)