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細(xì)胞成分的提取步驟有哪些?

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2025-05-10

二、成分提取 1. 初步分離 離心:低速離心(如500-1000×g,5分鐘)去除未破碎的細(xì)胞碎片;高速離心(如10,000×g,15分鐘)分離細(xì)胞器(如線粒體、細(xì)胞核)。 過濾:用濾膜(如0.22μm或0.45μm)去除大顆粒雜質(zhì)。 2. 目標(biāo)成分純化 蛋白質(zhì)提取: 使用裂解液(含去垢劑、鹽和緩沖液)溶解蛋白。 離心后收集上清液,通過親和層析(如His標(biāo)簽純化)、沉淀法(如硫酸銨沉淀)或電泳分離。 核酸提取: DNA:酚-氯仿抽提去除蛋白質(zhì),乙醇沉淀純化。 RNA:TRIzol法提取,注意避免RNase污染。 細(xì)胞器分離: 差速離心或密度梯度離心(如蔗糖梯度)分離線粒體、葉綠體等。 代謝物提取: 有機(jī)溶劑(如甲醇、乙腈)萃取,或冷凍干燥后溶解。 3. 濃縮與保存 濃縮:超濾離心管、凍干或真空濃縮。 保存:分裝后低溫保存(-20℃或-80℃),避免反復(fù)凍融。

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