一批技術驅動型初創公司正在細分領域嶄露頭角。例如，Synthelis（法國）專注于膜蛋白生產，其裂解物可實現GPCRs和離子通道的高效合成；ArborBiotechnologies（美國）則通過機器學習優化無細胞蛋白表達技術反應條件，用于CRISPR酶和定制化蛋白的快速開發。此外，GreenlightBiosciences（現已與Prenetics合并）將無細胞蛋白表達技術與mRNA技術結合，推動低成本疫苗和RNA療法生產。這些企業通常以授權合作或定制化服務模式，與藥企（如輝瑞、Moderna）建立深度綁定，加速技術商業化落地。芯片級體外蛋白表達平臺在個性化醫療中尤為關鍵，能夠為cancer患者快速篩選驅動突變的體外蛋白表達產物。大腸桿菌可溶蛋白表達注意事項

提升體外蛋白表達效能的關鍵技術路徑包括：裂解物工程化改造： CRISPR敲除核酸酶/蛋白酶基因增強穩定性，或過表達分子伴侶（如GroEL/ES）改善折疊；能量再生系統強化： 耦合葡萄糖脫氫酶與ATP合成酶模塊，實現ATP持續再生；膜蛋白表達突破： 添加脂質納米盤（Nanodiscs）提供類膜環境，促進跨膜結構域正確折疊；高通量篩選適配： 微流控芯片實現萬級反應并行運行，單次篩選規模超越傳統細胞方法。這些策略共同推動該技術向 更高效率、更低成本、更廣適用性 演進。高通量蛋白表達的優勢體外蛋白表達憑借其速度與靈活性的雙重優勢，在基礎研究、藥物開發和即時診斷領域持續釋放價值。

從裂解物來源看，無細胞蛋白表達技術主要分為原核系統和真核系統。原核系統以大腸桿菌S30提取物為主，成本低、耐受性強，適合表達簡單蛋白或引入非天然氨基酸，但缺乏復雜翻譯后修飾能力。真核系統包括兔網織紅細胞裂解物（RRL）和麥胚提取物（WGE），前者適合哺乳動物蛋白的高效表達，后者對植物和病毒蛋白更優，且能處理長鏈RNA，但成本較高。此外，昆蟲細胞提取物系統近年也用于復雜蛋白的修飾研究。英國nuclera 高通量微流控蛋白表達篩選系統可助力支持無細胞蛋白表達技術，如想了解更多信息，歡迎咨詢官方代理商上海曼博生物！

無細胞蛋白表達技術（CFPS）雖然具有快速、靈活等優勢，但仍存在一些關鍵缺點。首先，成本較高，商業化裂解物、能量試劑和酶的價格昂貴，小規模實驗單次反應成本可達數百元，大規模生產的經濟性尚未完全解決。其次，蛋白產量較低，反應通常在幾小時內終止，產量（0.1-1 mg/mL）遠低于細胞表達系統（如大腸桿菌可達10 mg/mL以上）。此外，復雜蛋白表達受限，原核裂解物缺乏真核翻譯后修飾能力（如糖基化），而真核裂解物成本更高；部分蛋白可能因折疊不完全而喪失活性。技術操作上，反應條件（pH、離子強度等）需精細調控，且線性DNA模板易降解，增加了實驗難度。CFPS目前更適合小規模應用，在超長蛋白（>100 kDa）表達和工業化連續生產方面仍面臨挑戰。未來需通過開發低成本試劑、優化能量再生系統和自動化工藝來突破這些瓶頸。合成生物學利用體外蛋白表達構造??無細胞代謝網絡??。

國內生物醫藥行業對CFPS的價值認知不足，傳統企業更依賴成熟的細胞表達系統（如CHO、大腸桿菌）。許多藥企認為無細胞蛋白表達技術只適用于“科研級小試”，對其在藥物開發（如ADC定點偶聯）、mRNA疫苗抗原快速制備等工業化潛力持觀望態度。同時，無細胞蛋白表達技術在復雜蛋白表達（如糖基化抗體）上的局限性也削弱了市場信心。相比之下，歐美已形成“CRO+藥企”的協同生態（如Moderna與CFPS服務商合作），而國內缺乏此類模范案例，導致技術推廣缺乏驅動力。科學家用細菌??進行蛋白表達??來生產胰島素。iptg誘導蛋白表達protocol

大腸桿菌體外蛋白表達??的成本只為兔網織紅細胞系統的1/20，適合大規模篩選。大腸桿菌可溶蛋白表達注意事項

體外蛋白表達技術的重點在于利用細胞裂解物中的生物合成機器（核糖體、tRNA、翻譯因子）在試管中直接合成蛋白質。以大腸桿菌系統為例：首先制備含T7啟動子的線性DNA模板，將其與商業化裂解物（如RocheRTS100）、能量混合物（ATP/GTP）及20種氨基酸混合，在37℃振蕩反應2-4小時即可完成蛋白表達。整個過程無需細胞培養與基因轉染，速度比傳統方法快10倍以上。例如，COVID19刺突蛋白RBD結構域的體外表達只需6小時，而HEK293細胞系統需5天。該技術的關鍵優勢是開放體系的可編程性——可直接添加非天然氨基酸（如Azidohomoalanine）合成定制化蛋白，為藥物偶聯物開發提供高效平臺。大腸桿菌可溶蛋白表達注意事項