人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。用于外泌體提取的體液收集注意事項:避免劇烈搖晃。寧波正規外泌體提取試劑廠家現貨
外泌體相關miRNA與肺病的診斷:miRNAs是一類含有20~25個核苷酸的非編碼小RNA,能夠通過下調或壓制靶mRNAs來調節轉錄水平上的基因表達,目前非編碼RNA被普遍發現存在于NSCLC患者外泌體中,參與一些病癥的形成和演化過程。單個miRNA可能通過壓制性復合物與多個mRNA結合,從而阻滯整個生物通路。因此,外泌體的miRNA具有成為NSCLC標志物的優勢。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環游離miRNA的表達,與75例健康者相比,發現了兩種高表達的miRNA(miR-25和miR-223)。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個miRNA的表達進行了評估,結果顯示,12個一些病癥相關的miRNA*在肺病患者中過度表達。Cazzoli等收集了30個血漿樣本,發現4種外泌體miRNA(miR-378a、-379a、-139-5p、-200b-5p)在肺病患者血清中明顯升高,用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積(AUC)為0.908。深圳外泌體提取試劑生產廠家外泌體提純試劑盒的特色與優勢:樣本輸入量多樣。
外泌體(exosome)是所有細胞釋放出的細菌大小的顆粒。它們天然地存在于血液中。根據來自美國德州大學MD安德森一些疾病中心的一項新的研究,對外泌體進行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法。論文通信作者為德州大學MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學系研究員RaghuKalluri博士。在這項新的研究中,經過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,從而導致胰腺病模式小鼠病情緩解,增加它們的總存活率。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運送小干擾RNA(siRNA)或短發夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細胞中的KRAS突變基因,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負荷和存活。他們證實外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發揮作用,這是因為這些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內遷移和進入靶細胞(包括病細胞)中。
外泌體與肺病預后:外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發現,外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,還有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發現,NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA,其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調,進一步研究發現,let-7f和miR-30e-3p水平可以區分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預后密切相關。人尿液來源細胞的外泌體的獲取方法,是首先分離培養人尿液來源細胞并收集培養基。
外泌體研究的主要應用:外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥。一些病癥轉移。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血病(AML)細胞的增殖、遷移和壓制細胞凋亡。治病靶標。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,從而特異性高效靶向至胰腺病細胞,以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉移過程。免疫。β細胞將含有蛋白質和miRNA的外泌體釋放到細胞外,并可轉移到其他代謝部位或免疫內皮細胞,有利于維持葡萄糖體內平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導miR-155從平滑肌細胞轉移到內皮細胞導致了內皮細胞的損傷促進動脈硬化。分子標記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發現循環EVs的水平上升。預后標志。外泌體的提取方法:超速離心法(差速離心)。天津正規外泌體提取試劑
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外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,多角度進行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察,即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標志物檢測:外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細胞質蛋白,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結合蛋白(Annexins);寧波正規外泌體提取試劑廠家現貨