高效液相色譜法介紹

基本原理

高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，是在經典液相色譜法的基礎上，于20世紀60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻。因為較小的填充顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。

使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，***通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法，***地應用于化學和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別，它的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，適于分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。

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高效液相色譜

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“**離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。 湖南賽默飛世爾Vanquish高效液相色譜系統采購可支持三個工作流程。雙梯度流路。同一集成式系統。

液相色譜類型

液相色譜按其分離機理，可分為四種類型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法

吸附色譜法

吸附色譜法的固定相為吸附劑，色譜的分離過程是在吸附劑表面進行的，不進入固定相的內部。與氣相色譜不同，流動相(即溶劑)分子也與吸附劑表面發生吸附作用。在吸附劑表面，樣品分子與流動相分子進行吸附競爭，因此流動相的選擇對分離效果有很大的影響，一般可采用梯度淋洗法來提高色譜分離效率。

在聚合物的分析中，吸附色譜一般用來分離添加劑，如偶氮染料、抗氧化劑、表面活性劑等，也可用于石油烴類的組成分析。

雙 LC 的 Vanquish Duo 系統更多細節

Vanquish Duo 系統可采用多種分析檢測器，包括質譜（MS）、二極管陣列檢測（DAD）、電霧式檢（CAD）、可變波長檢測（VWD）和熒光檢測（FLD）。

提供強大的分離性能

采用兩個相似的或者不同的色譜柱運行樣品以提高通量或盡可能提**析效率。也可以額外選配一個柱溫箱，以分別進行色譜柱的溫度控制。

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Thermo Scientific? Vanquish? Duo UHPLC 系統，將兩套梯度流路整合在一個超高效液相系統里，并能實現三種不同工作流程（雙LC，串聯液相或LCMS質譜前端，以及反梯度）這些工作流程可通過節約時間、減少每份樣品的成本、在不額外增加工作臺面的情況下提高儀器設備容量并更加高效地利用資源，以提升生產率。Vanquish Duo UHPLC 系統可在不影響性能、穩定性或易用性的情況下擴大 Vanquish 平臺的優勢。 增強定性、定量樣品信息。廣東高效液相色譜系統廠家報價

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高效液相色譜分離原理

液-液分配

(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。流動相與固定相之間應互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。當試樣進入色譜柱，溶質在兩相間進行分配。達到平衡時，服從于高效液相色譜計算公式：

式中，cs—溶質在固定相中濃度；cm—溶質在流動相中的濃度； Vs—固定相的體積；Vm—流動相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決于K，K大的組分保留值大；但也有不同之處，GPC中，流動相對K影響不大，LLPC流動相對K影響較大。

a.正相液-液分配色譜法(Normal Phase liquid Chromatography): 流動相的極性小于固定液的極性。

b.反相液-液分配色譜法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流動相的極性大于固定液的極性。

c.液-液分配色譜法的缺點：盡管流動相與固定相的極性要求完全不同，但固定液在流動相中仍有微量溶解；流動相通過色譜柱時的機械沖擊力，會造成固定液流失。上世紀70年代末發展的化學鍵合固定相（見后），可克服上述缺點。